Mise au point d'un test quantitatif avec lecture au cytomètre

en flux pour le diagnostic de la granulomatose septique chronique R. Riahi, A. El Beldi, I. Benmustapha-Darghouth, B. Larguèche, M. R. Barbouche

La granulomatose septique chronique (GSC) est un déficit immunitaire primitif caractérisé par une susceptibilité accrue aux infections bactériennes et fongiques. Ce déficit est lié à une anomalie génétique de la NADPH-oxydase des cellules phagocytaires qui se traduit par un défaut de production des dérivés oxygénés microbicides. Son diagnostic est basé sur les tests de bactéricidie notamment le test semi quantitatif de réduction du NitroBleu de Tétrazolium (NBT). Dans les cas douteux où la réduction est faible, une confirmation par un test quantitatif est souvent nécessaire. Nous avons développé dans le laboratoire un test quantitatif basé sur l'oxydation de la dihydrorhodamine 123 en rhodamine 123 par les dérivés oxygénés ( H2O2 et O2-) produit par les granulocytes après stimtulation par le PMA. La rhodamine émet une fluorescence détectée en cytométrie de flux dont l'intensité nous permet de quantifier le nombre de granulocytes fonctionnels (ayant produit des dérivés oxygénés). Depuis 2005, ce test a été réalisé pour 13 patients qui avaient tous un test NBT très abaissé ou abaissé après stimulation par le LPS. Le test quantitatif était concordant avec le test NBT très abaissé chez 6 patients avec une réduction de l'ordre de 4 % en moyenne (0%-9.5%) nous permettant de confirmer le diagnostic de GSC. Dans 4 autres cas le pourcentage de réduction avec le test quantitatif était normal, pour 2 d'entre eux seulement nous avons pu faire un test NBT après stimulation PMA revenu normal et qui était donc discordant avec le test NBT après stimulation LPS (très abaissé) faisant suspecter un déficit dans la voie de transduction de signal NFkB. Les 3 derniers patients avaient un poucentage de réduction intermédiaire (autour de 40%) malgré un test NBT abaissé et une symptomatologie clinique évocatrice de GSC ( abcès cutanés, infections ORL et pulmonaires à répétition, bécégite généralisée) Le test quantitatif nous permet de résoudre en grande partie les problèmes d'interprétation devant un test NBT faible. Cependant, les formes intermédiaires au test quantitatif avec une symptomatologie clinique évocatrice, posent le problème de leur étiologie : sont-elle en rapport avec des formes atténuées et/ou tardives de GSC ou une forme à pénétrance variable.